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如何選擇合適的蛋白酶抑制劑點擊次數:2202 更新時間:2017-04-18

   即使蛋白酶對細胞功能很重要,但你也有不想見到它們的時候。比如,在純化蛋白質的時候,你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標蛋白吧,特別是低豐度蛋白。如今,市場上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇,幫助你在必要時停止蛋白酶的活性。
  為了對付細胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶,抑制劑的選擇也在不斷增加。目前,主要有四種類型的蛋白酶,根據他們活性位點中的氨基酸命名:絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶。蛋白酶抑制劑可以特異針對一種蛋白酶,也可以是廣譜的。
  人們通常根據抑制劑作用的蛋白酶類型,以及它們可逆或不可逆,對蛋白酶抑制劑進行分類。如何選擇和使用?這似乎是一個難題,光看名字就已經讓人頭暈了。下面讓我們來聽聽專業人士的建議。
  從雞尾酒開始
  蛋白酶抑制劑的選擇,取決于每個用戶的個性化實驗,不過對于裂解細胞或勻漿組織的應用,抑制劑混合物(或者說雞尾酒)通常是個比較保險的選擇,可阻斷不同的蛋白酶。zui的抑制劑就是兩種混合物:Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF;這兩者都適用于裂解液。“它們普遍適用,適合許多樣品,無論是新鮮還是FFPE組織,抑或不同的物種,”的Sabrina Calabressi談道。
  若研究人員希望保留目的蛋白,同時維持細胞健康,默克密理博的Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物。她建議選擇針對四種蛋白酶的抑制劑,如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III。它可抑制哺乳動物細胞和組織中的天冬氨酸、半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶以及氨肽酶。
  有時,不那么特異的抑制劑似乎是個更好的選擇。“在裂解細胞或制備組織勻漿液時,使用具有廣譜特異性的抑制劑,”Mohan說。“它們應當快速反應,與蛋白酶不可逆結合,并在蛋白純化后輕松去除。”
  盡管如此,選擇困難癥還是圍繞著你。認為,嘗試不同的類型是供應商的責任,而不是研究人員的。
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